常規兔源多克隆抗體定制服務常規小鼠源多克隆抗體定制服務常規大鼠源多克隆抗體定制服務常規雞源多克隆抗體制備服務快速抗體制備服務多克隆抗體制備服務小鼠源單克隆抗體定制服務大鼠源單克隆抗體定制服務倉鼠源單克隆抗體定制服務兔子單克隆抗體制備雞單克隆抗體制備猴子單克隆抗體制備犬單克隆抗體制備單克隆抗體/雜交瘤細胞定制服務免疫組化保證性抗體制備轉錄后特殊修飾結構識別抗體制備抗專一亞型抗體制備配體模擬激活性抗體制備捕獲\報告配對抗體制備功能阻遏\專一型抗抗體制備特殊功能抗體制備服務膜蛋白抗體制備服務半抗原抗體制備服務脂質體免疫抗體制備服務自體抗原抗體制備服務特殊性質抗原抗體制備服務基于全細胞抗原呈遞的抗體制備方案基于傳統單克隆抗體制備方案G蛋白偶聯受體抗體制備服務抗離子通道蛋白抗體制備服務抗膜蛋白抗體制備專題噬菌體展示文庫構建工程化骨架蛋白文庫構建限制性多肽文庫構建噬菌體展示文庫篩選內化抗體篩選熱穩定性scFv/Fab篩選蛋白酶底物篩選單域抗體庫構建全人源單抗制備噬菌體展示和抗體文庫服務雙特異性納米抗體制備單域(納米)抗體庫構建納米抗體親和力成熟服務人源/人源化納米抗體制備DNA免疫技術制備膜蛋白納米抗體抗血腦屏障納米抗體制備納米抗體服務細菌展示服務核糖體展示服務酵母展示服務體外展示&其他服務酵母雙雜交篩選服務哺乳動物細胞雙雜交服務胞內抗體制備服務雙雜交服務原位雜交ISH熒光原位雜交FISH原位雜交服務X-射線晶體學通過肽庫方法通過LC-MS法通過三維電鏡方法基于生物信息學預測單克隆抗體表位作圖抗體測序服務表面等離子共振服務(SPR)等溫滴定量熱法服務(ITC)雙偏振極化干涉測量服務(DPI)差示掃描量熱法服務(DSC)免疫原性評價抗體親和力檢測抗體鑒定抗體分析服務二價和雙特異性scFv/Fab服務嵌合抗原受體(CAR)構建服務嵌合IgG構建scFV/Fab構建雙可變區免疫球蛋白制備服務定制半胱氨酸改型抗體超長CDR3s??固逯票?/a>非猴抗體的硅烷化抗體穩定性改進抗體親和力成熟抗體人源化服務抗體經典化服務人源抗體駱駝化服務人源抗體初始化服務抗體工程服務雙特異性T細胞銜接器(BiTE)Fab-scFv融合蛋白KNODBS-INTO-HOLE技術雜交瘤細胞系雙特異性抗體抗體和蛋白標記抗體生物素化Fab PEG化抗體偶聯藥物納米金標記抗體糖納米粒標記抗體標記服務酶和蛋白定向進化突變庫構建服務蛋白工程服務抗體人源化親和力成熟人源化牛超長CDR3抗體服務人源化納米抗體制備人源化猴單抗制備人源/人源化抗體服務蛋白/抗體偶聯服務生物素化服務寡聚糖生物偶聯寡核苷酸生物偶聯表面錨定服務脂質體偶聯服務PEG修飾服務合成聚合物修飾生物偶聯服務重組IgG制備scFv/Fab制備雙特異性抗體制備抗體和蛋白純化服務重組抗體制備服務穩定細胞系構建定制細胞裂解液穩定細胞系開發cGMP生產治療性抗體和蛋白生產大規模發酵服務cGMP生產大腸桿菌蛋白表達系統枯草芽孢桿菌表達系統酵母蛋白表達系統昆蟲桿狀病毒表達系統哺乳動物細胞蛋白表達系統富含二硫鍵蛋白的原核表達服務無細胞系統蛋白表達服務Marzf單一蛋白制備服務蛋白表達與純化服務抗體&多肽文庫重組抗體產品雜交瘤細胞系穩定細胞系CAR-T載體抗體定制服務平臺噬菌體展示平臺抗體藥物開發平臺CAR-T平臺蛋白表達與純化平臺大規模發酵服務平臺基因測序平臺
抗體人源化

抗體人源化

副標題

抗體人源化簡介

抗體人源化改造是增加異源抗體中人源序列比率的過程。隨著雜交瘤技術的發展,大批的與抗原有特異親和力的異源(通常是鼠源)抗體引起了人們的興趣,但是由于HAMA效應的存在,大大限制了這些抗體在臨床上的應用。而且這些異源抗體往往半衰期短,且能引起機體的炎癥效應??固迦嗽椿墓嘆褪墻餼鲆煸吹タ寺】固迕庖咴?,改善抗體對人體免疫系統的活化作用。

艾柏森生物擁有豐富的抗體人源化經驗,我們利用多種策略進行抗體的人源化改造,可以在保留抗體特異性的同時,大部分或者全部消除異源抗體在人體內的免疫原性。其中包括重構抗體、鏈替換抗體及表面重塑抗體等,通過建立噬菌體展示的人源化突變庫,篩選出高親和力的人源化抗體,也可以通過哺乳動物細胞表面展示技術建立人源化的IgG庫,通過FACS分類篩選。

艾柏森生物人源化服務基本流程:

抗體測序——同源建?!狢DR移植——設計改造

服務流程:

抗體人源化.1.png

技術流程:

艾柏森生物提供多樣化的策略,包括:

抗體人源化策略:CDR&SDR移植、鏈替換及人源IgG抗體庫篩??;

抗體親和力成熟策略包括:隨機突變、定點突變等多種突變方式;

結合專有人類抗體數據庫、電子建模等技術。

CDR移植抗體構建流程:

1.質控

對客戶提供的親本抗體做活性驗證,確認是否有必要進行人源化改造。

2.抗體基因獲得

提取雜交瘤細胞中mRNA,反轉錄為cDNA,PCR擴增VH和VL鏈,測序。

3.生物信息學方法設計人源化方案

3.1分析親本抗體VH和VL序列,進行亞型分類、計算機模擬抗體結構分析及多序列比對進行CDR區和FR區定位,確定FR區保守氨基酸及關鍵氨基酸殘基及其位置。

a. V區、CDR及FR序列的確定

抗體人源化.2.png

利用序列相似性搜索方法確定恒定區(CH和Cκ),然后找到序列引物,之間即為V區。將V區基因序列翻譯為氨基酸序列,通過Kabat數據庫和Swiss-Port數據庫比較,確定CDR和二硫鍵位置。

抗體人源化.3.png

表: h-TNFα鼠單抗CDR和FR確定;*代表二硫鍵的Cys位置

b.抗體V區結構同源建模及抗原抗體復合物模型構建

(1)模板蛋白的選擇

利用PDB數據庫,搜索抗體V區同源蛋白,從而確定模板蛋白結構和序列,如下圖。

抗體人源化.4.png

(2)SCR和Loop區的確定

利用Structure Superimpose法對模板蛋白進行結構相似性分析,確定模板蛋白的結構保守區(SCR)和無規則環區(Loop)。通過多序列比對,確定目的蛋白的SCR和Loop。

抗體人源化.5.png

(3)抗體VH和VL初始結構的獲得

抗體人源化.6.png

(4)初始結構構象優化及分子動力學模擬

首先用Insight Ⅱ(2000)中Rotamer軟件對模型構象的二面角調整,再用Discovery軟件,在CVFF、Gromos力場下,經最陡下降、共軛梯度、牛頓力學等步驟對抗體V區構象進行優化。再通過動力學優化,獲得穩定的空間構象。見圖1。

抗體人源化.7.png

圖:經過分子模擬、力學優化、動力學模擬獲得抗體VH和VL碳原子空間構象

(5)抗體V區空間構象合理性判斷

利用Ramachandran圖對獲得的抗體可變區構象進行評價,如下圖所示,不同顏色代表了氨基酸殘基構象的合理程度。紅色代表殘基構象匹配最佳,深黃色表示殘基構象允許區,土黃色表示構象可以,白色表示構象存在較大誤差。

抗體人源化.8.png

圖 利用Ramachandran圖對抗體的V區殘基進行構象評估

(5)抗體可變區Fv構象的獲得

選擇同一個包含VH和VL的構象的模板為參考,考慮VH和VL相互作用模式,分析可及性表面是和表觀靜電分布情況,利用Molecular Docking的方法獲得抗體V區構象。

抗體人源化.9.png

圖3 抗體可變區的空間構象

抗體人源化.10.png

(6)抗原-抗體復合物模型的建立

抗原-抗體相互作用復合物結構是合理判定抗原表位、抗體合理改造與設計的基礎。利用Molecular Docking方法,探討抗原-抗體相互作用,確認二者相互識別過程中靜電作用、氫鍵作用、疏水作用、范德華力作用等,預測二者的結合模式和親和能力,從而進行抗原表位合理預測、抗體人源化和親和力改造。

抗體人源化.11.png

圖   利用分子對接方法建立抗原-抗體復合物結構模型

(7)抗體FR區中重要氨基酸殘基的確定

利用SAS方程,計算可及性表面積;利用Delphi程序,計算表觀靜電分布?;諞韻略蛉范固錐R區中重要氨基酸殘基:

抗體人源化.12.png

3.2通過Kabat、Genebank和IMGT等數據庫檢索比對和輔助計算機分子模擬,尋找最大同源性的人FR區模板,設計CDR移植scFV,進行計算機結構模擬分析。

a. 人源抗體模板的選擇及FR區保守氨基酸的確定

在NCBI網站,運行IgBLAST,通過BlastP程序,檢索人源庫中鼠抗體V區同源序列,通過序列比對歸納出人抗體FR中高頻率出現的氨基酸殘基及位置。

抗體人源化.13.png

b. 鼠源抗體人源化過程中需要改變的殘基確定

根據可及表面積、表觀靜電分布及序列比對的結果,確定人源化過程中需要改變的氨基酸殘基。

抗體人源化.14.png

c. 點突變的Fv空間結構模擬

利用計算機建模、力學優化及動力學模擬得到人源化抗體的V區構象,通過結構疊合進行親本抗體和人源化抗體的構象比較。

d. 人源化后抗體活性預測

借助Molecular Docking和動力學模擬優化人源化后抗體-抗原復合物的結構,通過相互作用能、分子間氫鍵以及識別表位,從理論上評價異源抗體人源化后的生物學活性。

3.3表達重構抗體和親本scFV抗體

根據計算機模擬設計的人源化方案,合成基因,表達48-126個重構抗體,分別測定其與抗原的相對結合活性。測定親本scFV抗體親和力,挑選親和力最佳的人源化抗體克隆,進行親和力成熟改造。


人源/人源化抗體服務

相關服務:

★ 抗體人源化

★ 人源化牛超長CDR3抗體服務

★ 人源/人源化納米抗體制備

★ 人源化猴單抗制備

技術平臺:

 抗體定制服務平臺

在線咨詢
 工作時間
周一至周五 :8:30-22:30
周六至周日 :9:00-18:00
 聯系方式
客服熱線:400-965-8633
固定電話:010-57263834
郵箱:[email protected]

艾柏森(北京)生物科技有限公司

關于我們我們的服務我們的產品新聞動態

關于我們

抗體開發

噬菌體展示文庫

合作伙伴

技術平臺抗體工程多肽文庫官方微信
新聞動態
GMP生產雜交瘤細胞株留言板
聯系我們
蛋白表達與制備重組抗體友情鏈接


聯系我們

地址:北京經濟技術開發區永昌中路4號院4號樓

研發中心:無錫惠山經濟開發區惠山大道1699號

     生命園C區C3棟3層

電話:010-57263834
郵箱:[email protected]