常規兔源多克隆抗體定制服務常規小鼠源多克隆抗體定制服務常規大鼠源多克隆抗體定制服務常規雞源多克隆抗體制備服務快速抗體制備服務多克隆抗體制備服務小鼠源單克隆抗體定制服務大鼠源單克隆抗體定制服務倉鼠源單克隆抗體定制服務兔子單克隆抗體制備雞單克隆抗體制備猴子單克隆抗體制備犬單克隆抗體制備單克隆抗體/雜交瘤細胞定制服務免疫組化保證性抗體制備轉錄后特殊修飾結構識別抗體制備抗專一亞型抗體制備配體模擬激活性抗體制備捕獲\報告配對抗體制備功能阻遏\專一型抗抗體制備特殊功能抗體制備服務膜蛋白抗體制備服務半抗原抗體制備服務脂質體免疫抗體制備服務自體抗原抗體制備服務特殊性質抗原抗體制備服務基于全細胞抗原呈遞的抗體制備方案基于傳統單克隆抗體制備方案G蛋白偶聯受體抗體制備服務抗離子通道蛋白抗體制備服務抗膜蛋白抗體制備專題噬菌體展示文庫構建工程化骨架蛋白文庫構建限制性多肽文庫構建噬菌體展示文庫篩選內化抗體篩選熱穩定性scFv/Fab篩選蛋白酶底物篩選單域抗體庫構建全人源單抗制備噬菌體展示和抗體文庫服務雙特異性納米抗體制備單域(納米)抗體庫構建納米抗體親和力成熟服務人源/人源化納米抗體制備DNA免疫技術制備膜蛋白納米抗體抗血腦屏障納米抗體制備納米抗體服務細菌展示服務核糖體展示服務酵母展示服務體外展示&其他服務酵母雙雜交篩選服務哺乳動物細胞雙雜交服務胞內抗體制備服務雙雜交服務原位雜交ISH熒光原位雜交FISH原位雜交服務X-射線晶體學通過肽庫方法通過LC-MS法通過三維電鏡方法基于生物信息學預測單克隆抗體表位作圖抗體測序服務表面等離子共振服務(SPR)等溫滴定量熱法服務(ITC)雙偏振極化干涉測量服務(DPI)差示掃描量熱法服務(DSC)免疫原性評價抗體親和力檢測抗體鑒定抗體分析服務二價和雙特異性scFv/Fab服務嵌合抗原受體(CAR)構建服務嵌合IgG構建scFV/Fab構建雙可變區免疫球蛋白制備服務定制半胱氨酸改型抗體超長CDR3s??固逯票?/a>非猴抗體的硅烷化抗體穩定性改進抗體親和力成熟抗體人源化服務抗體經典化服務人源抗體駱駝化服務人源抗體初始化服務抗體工程服務雙特異性T細胞銜接器(BiTE)Fab-scFv融合蛋白KNODBS-INTO-HOLE技術雜交瘤細胞系雙特異性抗體抗體和蛋白標記抗體生物素化Fab PEG化抗體偶聯藥物納米金標記抗體糖納米粒標記抗體標記服務酶和蛋白定向進化突變庫構建服務蛋白工程服務抗體人源化人源化牛超長CDR3抗體服務人源化納米抗體制備人源化猴單抗制備人源/人源化抗體服務蛋白/抗體偶聯服務生物素化服務寡聚糖生物偶聯寡核苷酸生物偶聯表面錨定服務脂質體偶聯服務PEG修飾服務合成聚合物修飾生物偶聯服務重組IgG制備scFv/Fab制備雙特異性抗體制備抗體和蛋白純化服務重組抗體制備服務穩定細胞系構建定制細胞裂解液穩定細胞系開發cGMP生產治療性抗體和蛋白生產大規模發酵服務cGMP生產大腸桿菌蛋白表達系統枯草芽孢桿菌表達系統酵母蛋白表達系統昆蟲桿狀病毒表達系統哺乳動物細胞蛋白表達系統富含二硫鍵蛋白的原核表達服務無細胞系統蛋白表達服務Marzf單一蛋白制備服務蛋白表達與純化服務抗體&多肽文庫重組抗體產品雜交瘤細胞系穩定細胞系CAR-T載體抗體定制服務平臺噬菌體展示平臺抗體藥物開發平臺CAR-T平臺蛋白表達與純化平臺基因工程平臺
大腸桿菌蛋白表達系統

大腸桿菌蛋白表達系統

Protein Expression in Bacteria

大腸桿菌表達系統簡介

1. 代謝途徑和基因表達調控機制比較清楚

 1) 全基因組測序,共有4405個開放性閱讀框架;

 2) 基因克隆表達系統成熟完善;

 3) 繁殖迅速,培養簡單,操作方便,遺傳穩定。

2. 培養周期短

 1) 大腸桿菌繁殖能力強,在營養條件充足時,20~30mins即可繁殖一代;

 2) 大規模發酵成本低,具有巨大的生存潛力。

3. 目標基因表達水平高

 表達水平較一般真核表達系統高,某些外源基因在大腸桿菌中的表達量可達總蛋白的5%~30%。

4. 遺傳背景清楚

 1) 對大腸桿菌的遺傳背景和生理特性研究相當清楚,已有多種不同的抗藥性、不同營養缺陷型和不同校正突變型的菌株供選擇使用;

 2) 可以根據不同的載體而選擇不同的菌株。

5. 抗污染能力強,下游工藝簡單,易于控制。

6. 已有大量可供選擇利用的表達載體,被美國FDA批準為安全的基因工程受體菌。

艾柏森生物大腸桿菌表達系統優勢

1. 艾柏森生物大腸桿菌可溶性表達成功率高達95%;

2. 艾柏森生物可以提供多種大腸桿菌表達載體,pET28b、pET22b、pGEX-6P-1等。

3. 多種大腸桿菌表達宿主,標準表達菌株BL21,可增強表達蛋白的菌株T7E,表達毒性蛋白的C41,增強蛋白可溶性表達的超低溫菌株Arctic,以及其他經過艾柏森生物分子技術團隊改造過的表達菌株,可以滿足客戶的不同需求。

4. 表達系統的優化。通過對表達系統進行優化,很大程度上解決蛋白不表達和包涵體的問題,如表達載體與表達菌株相容性測試、誘導表達條件的優化、復性等。

服務組合

服務項目 (Service Items)
周期(周) Time(weeks)
蛋白分析與密碼子優化
項目開始前完成
基因合成
2~4
載體構建
1
基因表達純化測試
2
1L發酵表達及純化
2
切標簽
2
大規模的發酵與純化
以項目需要為準
總計
8~10


注:

1)表達純化測試一般包括2種載體,3種表達菌株,2個表達溫度,12個條件的測試,根據客戶的前期實驗結果,有可能調整或縮短試驗周期;

2)我們可提供的備選優化條件如下:


表達載體
pET28b\pET32a\pGEX-6p-1\pET22b\pBAD\pTrcHis等
表達菌株
Arctic\BL21(DE3)\Origami\Rosetta\T7 Expresss
表達溫度
16℃\30℃\37℃


經典案例

以某原核蛋白為例:

1. 優化表達體系,包括蘇朱軍、誘導溫度、誘導時間、誘導劑濃度及培養基。


宿主菌
誘導溫度
誘導時間
誘導劑
培養基
T7E,BL21,C41,Arctic
30/37
1h/4h
IPTG自誘導
LB/定制/同位素/自誘導


經過3輪優化,我們選擇了BL21+pGEX-6p-1組合,并發現溫度對與目標蛋白的表達影響最大,如圖一


圖一:融合蛋白小試SDS-PAGE分析圖

M:ProteinMarker;:誘導前總蛋白;

2:20℃上清;3:20℃沉淀;4:37℃上清;5:37℃沉淀。

2. 在確定了最優表達條件后,我們對蛋白進行了GST瓊脂糖親和層析嘗試純化,如圖二,


     

圖二:GST瓊脂糖親和層析純化SDS-PAGE分析圖

M:Protein marker;S:上樣;F:流出;1:20mM GSH洗脫組分;

3. 在確定純化效率可以接受的條件下,我們對蛋白進行了大體積發酵,并最終純化SDS-PAGE分析,如圖三,融合蛋白經過純化,SDS-PAGE電泳分析在相應位置出現明顯條帶,表明目的蛋白成功得到了純化。


 

圖三:蛋白最終純化SDS-PAGE分析圖

M:Protein marker;1:目的蛋白

4. 蛋白濃度測定

采用SK3071 非干擾型蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度為1.06mg/mL,待測樣品體積為10μL,結果如下:


測試1
測試2
平均值
BSAμg
0.939
0.939
0.939
0
0.875
0.874
0.8745
8
0.808
0.804
0.806
16
0.74
0.746
0.743
24
0.618
0.616
0.617
40
0.855
0.849
0.852
50
0.891
0.878
0.8845
目的蛋白

圖四:蛋白濃度測定

蛋白表達純化技術服務

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